懸浮細胞總是在孵抗體和洗的時候被沖掉情況正常，懸浮細胞做免疫熒光怎么固定不合理波動？

傳統(tǒng)方法

實驗步驟：

1. 細胞在冰浴中冷卻共創輝煌，然后用臺式離心機于4℃以800 g 離心5 min，吸去培養(yǎng)液并以4℃PBS重懸細胞問題。

2. 離心吸去PBS發展邏輯，以1~2 ml 2%PFA固定液，或2%PFA固定液/0.1% Triton X-100重懸細胞綜合運用，置冰上固定30 min合作關系。

3. 離心顯示、吸去固定液引領作用，用15 ml 4℃ PBS重懸細胞加強宣傳，放5 min 后，用PBS再次洗滌細胞用的舒心。

4. 稀釋的第一抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min技術發展，250 μl 抗體足夠用于5x106細胞。

5. 離心細胞集成，吸去PBS重要手段，重懸細胞于第一抗體中，置4℃溫育1 h穩定性。

6. 用4℃ PBS稀釋細胞和抗體至15 ml像一棵樹。

7. 離心，吸去PBS去突破，以4℃ PBS重懸細胞能運用，重復1次。

8. 第二抗體4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min智能設備，5x106細胞用250 ul 抗體足夠不可缺少。

9. 吸去PBS，以第二抗體重懸細胞特點，4℃溫育1 h重要的角色，重復步驟6及步驟7。

10. 除非立即觀察細胞高質量，否則在進行細胞濃縮的下一步操作之前應以鋁萡包裹離心管并冷藏。

11. 離心細胞并以少量PBS重懸（勿用水）記得牢，將細胞懸液滴于多聚-L-賴氨酸覆層的載玻片上註入了新的力量，加上蓋玻片，盡可能馬上觀察結果更多可能性。 

鏡下觀察：沒有細胞去創新，原來掉片了！＞o迫性〗Y構！

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